Ключевые особенности
| Особенность | Описание | ||
|---|---|---|---|
| Производитель / Бренд | Edvotek Inc. (США) | ||
| Каталожный номер | 317 | ||
| Название | Western Blot Analysis (Polyacrylamide-based) / Вестерн-блот анализ (на основе полиакриламида) | ||
| Количество учащихся / групп | 6 вестерн-блотов (на 6 групп) | ||
| Время выполнения | Электрофорез — 60 минут | Блоттинг — на ночь (overnight) | Детекция — 2.5 часа |
| Цель эксперимента | Изучение метода вестерн-блоттинга для идентификации специфических белков с использованием антител; определение молекулярной массы белков по маркерам | ||
| Уровень сложности | Средний / Продвинутый | ||
| Принцип метода | SDS-электрофорез в полиакриламидном геле → перенос белков на мембрану (без электропереноса) → детекция с помощью первичных и вторичных антител → ферментативная цветная реакция |
Технические характеристики
| Параметр | Значение |
|---|---|
| Тип набора | Лабораторный практикум по белковой химии и иммунодетекции |
| Методы | SDS-PAGE (электрофорез в полиакриламидном геле), вестерн-блоттинг (капиллярный перенос), иммунодетекция |
| Исследуемые объекты | Белки-антигены (BSA — бычий сывороточный альбумин) |
| Антитела | Первичные антитела к BSA + вторичные антитела, конъюгированные с ферментом |
| Форма контроля | Визуальная детекция окрашенных полос на мембране после ферментативной реакции |
| Уровень образования | Старшая школа (профильные классы), начальные курсы колледжей и вузов |
Комплектация (что входит в набор)
Набор включает материалы для 6 вестерн-блотов :
| Категория | Компоненты |
|---|---|
| Образцы белков | Лиофилизированный отрицательный контроль BSA; лиофилизированные образцы BSA высокой и низкой концентрации |
| Антитела | Первичные антитела к BSA; вторичные антитела, конъюгированные с ферментом |
| Реагенты для детекции | Перекись водорода; субстрат пероксидазы (peroxide co-substrate) |
| Буферы и растворы | Блокирующий буфер (blocking buffer); PBS-буфер; трис-глицин-SDS электрофорезный буфер |
| Маркер молекулярной массы | Пре-окрашенный маркер (pre-stained protein standard marker) |
| Материалы для блоттинга | Нейлоновые мембраны; фильтровальная бумага |
| Дополнительные материалы | Сухое молоко (для блокировки) ; инструкция с теоретическими основами и протоколом |
Необходимое дополнительное оборудование и материалы
Для проведения практикума требуется следующее оборудование, которое не входит в набор :
| Категория | Необходимые компоненты |
|---|---|
| Для электрофореза | 3 полиакриламидных геля (12%) (требуются отдельно) ; вертикальная камера для электрофореза (MV-10 или аналогичная); источник питания (DC power supply) |
| Дозирование | Автоматическая микропипетка с тонкими наконечниками |
| Лабораторная посуда | Мерные цилиндры, стеклянная посуда, линейки |
| Реактивы | Ледяная уксусная кислота (glacial acetic acid) ; метанол (methanol) ; дистиллированная или деионизированная вода |
Этапы эксперимента
-
Денатурация белков (День 1): Ресуспендирование лиофилизированных образцов, нагревание для разрушения агрегатов денатурированных белков .
-
Электрофорез (SDS-PAGE): Загрузка образцов в лунки геля (по 20 мкл), проведение электрофореза при рекомендуемом напряжении .
-
Блоттинг (капиллярный перенос): Подготовка мембраны и фильтровальной бумаги, сборка блот-сэндвича. Важно: набор не требует аппарата для электропереноса, используется капиллярный перенос .
-
Блокировка: Инкубация мембраны в блокирующем буфере (сухое молоко) для предотвращения неспецифического связывания антител .
-
Инкубация с антителами: Последовательная обработка мембраны раствором первичных антител, затем — раствором вторичных антител, конъюгированных с ферментом .
-
Детекция: Погружение мембраны в субстратный раствор для развития цветной реакции .
-
Интерпретация: Измерение молекулярной массы выявленных полос с использованием пре-окрашенного маркера .
Область применения
Набор идеально подходит для:
| Уровень образования | Применение |
|---|---|
| Старшая школа (профильные классы) | Изучение методов иммунодетекции белков; подготовка к олимпиадам по биологии |
| Колледжи и вузы | Начальные курсы по молекулярной биологии, биохимии, иммунологии |
| Лабораторные практикумы | Отработка навыков SDS-PAGE и вестерн-блоттинга |
Условия хранения
| Компонент | Условия хранения |
|---|---|
| Набор при поставке | Комнатная температура |
| Лиофилизированные белки | Комнатная температура |
| Другие компоненты | Требуют хранения в холодильнике |